PRM（PARALLEL REACTION MONITORING）靶向蛋白质组学
产品简介
PRM（parallel reaction monitoring）靶向蛋白质组学是一项基于质谱检测的全新精准靶向定量技术，具有特异性强、灵敏度高、准确性高等特点。
技术优势
PRM技术适用性广，无物种限制，且通量高，可一次性检测20-100个目标蛋白质，极大节省样本及实验成本。
灵敏度高，可达ppm级别，线性范围可达5-6个数量级。
特异性高，可精细区分亚型、修饰位点、突变位点等精细序列差异。
PRM靶向蛋白质组学与Western Blot对比
Western Blot | PRM | |
实验原理 | 抗原抗体结合，通过通过检测抗体含量间接获得目的蛋白表达量 | 通过质谱对目标蛋白质的肽段进行选择性监测和碎裂分析，对目标蛋白进行定量 |
检测范围 | 依赖抗体特异性，有物种限制 | 无物种限制 |
检测通量 | 1个目标蛋白/次 | 20-100个目标蛋白/次 |
重复性 | 人工操作，干扰因素多 | 标准化仪器操作，可重复性好 |
仪器平台
Thermo Q Exactive HF（X）
服务流程
推荐组合产品
DIA+PRM
PRM送样建议
| 样本类型 | 推荐起始量 | 建议样品处理流程 |
细胞 | >5×106
| 贴壁细胞 1.倾掉培养基，用PBS清洗3次，加入胰酶； 2.消化好的细胞转入EP管，室温3000 g离心5 min，弃掉上清； 3.PBS清洗3次，上清吸净，细胞沉淀立即-80℃冰箱储存。 或者 1.倾掉培养基，用PBS清洗3次后加入裂解液； 2.细胞刮刮细胞培养板，收集细胞裂解液，立即-80℃冰箱储存。 悬浮细胞 1. 3000×g离心5min收集细胞沉淀； 2.PBS清洗3次，立即-80℃冰箱储存。 |
动物组织 | >15mg | 1.取目标部位组织，迅速取材且大小均一，将组织切成0.5cm左右的小块； 2.组织小块浸入PBS，洗掉组织中残留的血； 3.用无尘纸吸净表面的液体，立即-80℃冰箱储存。 |
植物组织 | >50mg | 1.选取干净的目标部位组织，迅速取材且保证取材均一；将组织剪成0.5cm左右的小块； 2.组织立即-80℃冰箱储存。 |
微生物 | >20mg | 1.收集菌体培养物，3000g离心5min，弃掉培养基； 2.PBS清洗3次，保留细菌沉淀，-80℃冰箱储存。 |
血清/血浆 | >50μL | 血清 取普通采血管收集血液，室温静置，上层洗出的液体即为血清。 血浆 取抗凝采血管收集血液，使血液与管壁充分接触，1000×g 4℃离心10-15min,上层即为血浆。 |
案例分析
颅内动脉瘤（Intracranial aneurysm，IA）是一种人群内发病率较高的疾病，占到普通人群的2-3%。目前针对IA的诊断，尚依赖于影像学判断如数字减影血管造影（DSA），但DSA成本高、效率低，且DSA检查的有创性和形态学参数的宽泛性并不适合精准医学的要求。而目前针对IA，尚无可用于预测的标志物。
复旦大学刘晓慧课题组在EMBO Molecular Medicine杂志在线发表一篇题为：Circulating proteomic panels for risk stratification of intracranial aneurysm and its rupture的论文，通过DIA+PRM的全面血清标志物筛选及验证方法，揭示了可能存在的颅内动脉瘤临床血清标志物以及疾病发生发展可能的机制。
研究者首先针对IA的手术切除组织和血清开展系统的DIA蛋白质组学研究，建立了目前已报导鉴定量全面的动脉瘤组织和血清轮廓谱，在组织和血清中分别鉴定到5915个蛋白质和1557个蛋白质，分别找到724个差异蛋白和144个差异蛋白。在此基础上，在大规模血清队列中进行PRM验证，构建了一个全面的IA潜在血清蛋白质标志物数据库。
