DIA（Data Independent Acquisition）磷酸化蛋白质组学
产品简介
蛋白质磷酸化是一种常见的蛋白质翻译后修饰形式，蛋白质磷酸化主要涉及与丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的羟基侧链形成磷酸酯键，这些磷酸化过程在细胞信号传导和细胞命运调控过程中起着关键作用。磷酸化蛋白组的研究不仅仅是针对单一蛋白质或少数蛋白质的磷酸化位点分析，而是旨在全面地鉴定和量化细胞、组织或生物体中所有蛋白质的磷酸化状态。通过磷酸化蛋白组可以了解蛋白表达及发挥功能的调控机制，以及发现与疾病相关的磷酸化蛋白质，进而为新药物的研发提供潜在的靶点。
发生磷酸化修饰的氨基酸上共价连接磷酸基团，其分子质量会增加79.97Da。基于数据非依赖采集（Data-Independent Acquisition，DIA）技术，无偏向性采集质谱扫描范围内所有信号，可测定分子量是否发生79.97Da的质量偏移，从而检测磷酸化修饰肽段及位点。
技术优势
1.基于DIA数据采集模式，大大减少高丰度干扰，全面采集高低丰度信号，数据覆盖度显著提高。
2.提供上游激酶分析，助力客户发现潜在的药物靶点。
3.系统解决方案-提供蛋白组和磷酸化蛋白组联合分析，实现科研一站式服务。
仪器平台
TimsTOF fleX
Astral
TimsTOF Pro2
服务流程
分析内容
标准分析内容 | |
质控评价 | QC样本评价；组间样本鉴定评价；样本定量波动评价；DIA体系评价 |
蛋白质鉴定分析 | 鉴定与定量结果统计；单个样本蛋白质鉴定结果统计；韦恩图；主成分分析；蛋白质丰度分析 |
差异蛋白分析 | 差异蛋白统计；火山图；箱线图；聚类热图 |
功能分析 | 亚细胞定位；GO富集分析；KEGG/Reactome通路分析；GSEA分析；转录因子分析；互作网络分析； |
激酶分析 | 激酶注释、激酶-底物关系分析、KSEA分析、激酶树注释 |
个性化分析 | 与客户协商后按实际情况执行 |
推荐组合
DIA蛋白组+磷酸化蛋白组
送样建议
样本类型 | 推荐起始量 | 建议样品处理流程 |
细胞 | >5×106
| 贴壁细胞 1.倾掉培养基，用PBS清洗3次，加入胰酶； 2.消化好的细胞转入EP管，室温3000 g离心5 min，弃掉上清； 3.PBS清洗3次，上清吸净，细胞沉淀立即-80℃冰箱储存。 或者 1.倾掉培养基，用PBS清洗3次后加入裂解液； 2.细胞刮刮细胞培养板，收集细胞裂解液，立即-80℃冰箱储存。 悬浮细胞 1.3000×g离心5min收集细胞沉淀； 2.PBS清洗3次，立即-80℃冰箱储存。 |
动物组织 | >30mg | 1.取目标部位组织，迅速取材且大小均一，将组织切成0.5cm左右的小块； 2.组织小块浸入PBS，洗掉组织中残留的血； 3.用无尘纸吸净表面的液体，立即-80℃冰箱储存。 |
植物组织 | >2g
| 1.选取干净的目标部位组织，迅速取材且保证取材均一；将组织剪成0.5cm左右的小块； 2.组织立即-80℃冰箱储存。 |
微生物 | >120mg | 1.收集菌体培养物，3000g离心5min，弃掉培养基； 2.PBS清洗3次，保留细菌沉淀，-80℃冰箱储存。 |
血清/血浆 | >100μL | 血清 取普通采血管收集血液，室温静置，上层洗出的液体即为血清。 血浆 取抗凝采血管收集血液，使血液与管壁充分接触，1000×g 4℃离心10-15min，上层即为血浆。 |
案例分析
