DIA（Data Independent Acquisition）蛋白质组学
产品简介
DIA（Data Independent Acquisition）蛋白质组学是一种基于质谱技术的非标记蛋白质分析方法，其技术原理在于使用预设的质荷比（m/z）窗口对所有肽段进行统一扫描，而不是根据前置扫描的结果选择特定的肽段进行扫描。这种全面扫描的方式使得DIA技术能够同时分析更多的蛋白质和肽段，提高了蛋白质组学研究的深度和广度，适合大样本量的蛋白质定量研究。
技术优势
1.全面性：Direct DIA技术能够同时检测样品中的所有蛋白质，无需事先选择或筛选目标蛋白质，从而确保了数据的全面性。
2.高通量：由于采用了非选择性的扫描方式，DIA技术能够在短时间内处理大量的样品，提高了分析效率。
3.高准确性和可重复性：在2017年一篇发表于Nature Communications的论文中，研究者选取位于全球不同地点的11家质谱检测实验室，采用同样的样品收集及信息分析流程，对DIA技术进行准确性和重复性评估，结果表明基于DIA技术进行的蛋白质定量检测有非常好的准确性和可重复性。
仪器平台
Thermo Scientific Q Exactive HF-X
Thermo Scientific Orbitrap Fusion Lumos
Thermo Scientific Q Exactive
服务流程
分析内容
标准分析内容 | |
质控评价 | QC样本评价；组间样本鉴定评价；样本定量波动评价；DIA体系评价 |
蛋白质鉴定分析 | 鉴定与定量结果统计；单个样本蛋白质鉴定结果统计；韦恩图；主成分分析；蛋白质丰度分析 |
差异蛋白分析 | 差异蛋白统计；火山图；箱线图；聚类热图 |
功能分析 | 亚细胞定位；GO富集分析；KEGG/Reactome通路分析；GSEA分析；转录因子分析；互作网络分析； |
个性化分析 | 与客户协商后按实际情况执行 |
送样建议
样本类型 | 推荐起始量 | 建议样品处理流程 |
细胞 | >5×106
| 贴壁细胞 1.倾掉培养基，用PBS清洗3次，加入胰酶； 2.消化好的细胞转入EP管，室温3000g离心5min，弃掉上清； 3.PBS清洗3次，上清吸净，细胞沉淀立即-80℃冰箱储存。 或者 1.倾掉培养基，用PBS清洗3次后加入裂解液； 2.细胞刮刮细胞培养板，收集细胞裂解液，立即-80℃冰箱储存。 悬浮细胞 1.3000×g离心5min收集细胞沉淀； 2.PBS清洗3次，立即-80℃冰箱储存。 |
动物组织 | >15mg | 1.取目标部位组织，迅速取材且大小均一，将组织切成0.5cm左右的小块； 2.组织小块浸入PBS，洗掉组织中残留的血； 3.用无尘纸吸净表面的液体，立即-80℃冰箱储存。 |
植物组织 | >50mg | 1.选取干净的目标部位组织，迅速取材且保证取材均一；将组织剪成0.5cm左右的小块； 2.组织立即-80℃冰箱储存。 |
微生物 | >20mg | 1.收集菌体培养物，3000g离心5min，弃掉培养基； 2.PBS清洗3次，保留细菌沉淀，-80℃冰箱储存。 |
血清/血浆 | >50μL | 血清 取普通采血管收集血液，室温静置，上层洗出的液体即为血清。 血浆 取抗凝采血管收集血液，使血液与管壁充分接触，1000×g 4℃离心10-15min,上层即为血浆。 |
结果展示
案例分析
北京大学医学部精准医疗多组学研究中心主任黄超兰团队，与中国科学院院士高福团队合作在Nature Communications杂志发表了题为：Immune suppression in the early stage of COVID-19 disease的研究论文。研究者对来自健康志愿者，COVID-19患者和非COVID-19肺炎患者的尿液样本开展了基于DIA方法的定量蛋白质组学分析。结果显示，与健康志愿者和非COVID-19肺炎患者相比，共有1986个蛋白在COVID-19患者体内发生显著变化，其中下调蛋白比上调蛋白的总数多出十倍，大量参与免疫应答和紧密连接形成的蛋白均呈现下调状态。该研究发现早期的新冠感染患者存在着显著的免疫抑制，并提出COVID-19的发病机制或存在“两阶段”模式：一阶段涉及免疫系统抑制、紧密连接受损以及大规模的代谢紊乱；二阶段涉及部分免疫应答激活，可能进一步导致细胞因子风暴和器官损伤的发生。
